DNA甲基化是极具潜力的早筛及MRD的标志物，基于NGS的甲基化检测中，重亚硫酸氢盐转化是DNA甲基化检测的“金标准”，转化率可达99.5%以上，但重亚硫酸盐处理会导致严重的DNA损伤、片段化及解链。此外，一些低质量或严重降解的DNA（cfDNA、ctDNA、FFPE DNA、古生菌DNA等）中也含有大量的DNA单链，采用常规双链建库，文库转化效率较低，测序数据质量差。而单链建库可以大幅提高DNA原始分子的利用率，提高文库的复杂性，在低起始量样本的甲基化文库和基因组文库构建中具有显著的优势。

图1. 甲基化单链建库流程图

甲基化单链建库流程

甲基化转化：重亚硫酸盐（Bisulfite）处理DNA，使未甲基化的C转化为U；

变性：双链DNA变性为单链DNA；

3’接头连接：TdT末端转移酶催化单链DNA的3’羟基端加上同聚物尾巴（poly C），E.coli DNA Ligase 连接3’接头；

二链合成：DNA Ploymerase I或Klenow Fragment进行单链DNA互补链合成；

5’接头连接：T4 DNA Ligase 连接5’接头；

文库扩增：耐U高保真DNA聚合酶扩增，获取含有完整接头序列的上机文库。

永利3044集团官网通过ZymeEditor酶改造平台对用于单链建库的全套酶原料进行性能提升及工艺优化，用于单链建库可显著提高文库转化率，助力甲基化检测。

性能展示

01

不同投入量Human gDNA单链建库，文库产量更高

对不同投入量的Human gDNA进行亚硫酸盐转化，使用永利3044集团官网全套建库酶原料进行单链建库，结果显示使用永利3044集团官网酶原料进行单链建库，文库产量显著优于进口品牌（图2），Map率（图3）及Dup率（图4）与进口品牌相当。

图2. 不同投入量gDNA建库产量

图3.不同投入量gDNA map率

图4.不同投入量gDNA Dup率

02

不同类型样本进行单链建库，文库产量更高

对cfDNA及FFPE DNA样本进行亚硫酸盐转化，使用永利3044集团官网全套建库酶原料进行单链建库，结果显示使用永利3044集团官网酶原料进行单链建库，文库产量显著优于进口品牌（图5 A），map率（图5 B）及Dup率（图5 C）与进口品牌相当。

图5. 不同样本单链建库产量、Map率及Dup率

单链建库解决方案

产品定位	产品名称	产品货号
亚硫酸氢盐转化	Hieff® Mag DNA Methylation Bisulfite Kit	12223ES
3’端添加poly C	Terminal Deoxynucleotidyl Transferase末端转移酶	10302ES
3’接头连接	E. coli DNA ligase (60 U/μL)	14955ES
3’接头连接	Taq DNA Ligase	11051ES
DNA二链合成	DNA polymerase I	12903ES
	Klenow Fragment	14458ES
	Klenow Fragment (3'→5' exo-)	14460ES
5’接头连接	Hieff® Quick T4 DNA Ligase	10301ES
PCR文库扩增	Hieff Canace® Uracil+ High-Fidelity DNA polymerase (1 U/μL)	10145ES
完整甲基化建库试剂盒	Hieff NGS® Methyl-seq DNA Library Prep Kit for Illumina® V2	12221ES

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