荧光染料法RT-LAMP是将荧光染料(如SYBR Green、Syto等)作为荧光标记物,在扩增反应中与双链DNA结合后,荧光信号会增强800-1000倍。使用荧光定量PCR仪在60-65℃恒温条件下进行测试,约30min后即可通过扩增结果判断是否感染病原体。
RT-LAMP Lyo-Ready Fluorescent Assay Kit(Bst Plus) 是一款能以DNA和RNA为模板进行等温扩增的试剂盒。本试剂盒采用新一代的适配体封闭的Bst Plus DNA Polymerase和耐热Hifair® Ⅲ Reverse Transcriptase、MRI,搭配精细优化的缓冲体系,实现高效快速和高特异性的检测反应,并且可支持室温配置反应体系。试剂盒中的缓冲液和酶组分都不含有甘油,配合提供的冻干保护剂可用于冻干。
1、通用性:验证20多对动物和人相关的病原靶标,GC含量30%-65%,阳性出峰时间与市面上同类产品相当。
2、特异性:验证多组DNA和RNA靶标,特异性均优于市面同类产品,60min内NTC无非特异起峰,或出峰时间晚于竞品。
3、灵敏度:检测真实样本提取的非洲猪瘟核酸,灵敏度可达15拷贝/反应;检测乙型流感病毒质控品,灵敏度可达10拷贝/反应。
4、稳定性:反复冻融20次性能不受影响;37℃热加速7天性能不受影响;支持室温配置反应体系。
5、酶组分不含甘油,提供冻干保护剂及冻干程序,可用于冻干制品的制备。
1、灵敏度测试
采用真实样本提取的非洲猪瘟样本核酸,以及乙型流感病毒质控品,用数字PCR定量模板浓度后,测试16730的检出情况,检出定义为30min以内起峰,结果显示16730检测灵敏度优异。

图1. 16730不同靶标灵敏度测试
2、稳定性测试
在多个LAMP、RT-LAMP体系中,同时测试16730反复冻融、热加速后的试剂与-20℃正常保存试剂(T0)的性能,结果显示:16730反复冻融20次、37℃ 放置7天后,阳性检出不受影响,且无非特异扩增,产品稳定性好。

图2. 16730反复冻融和热加速稳定性测试
-25~-15℃保存,有效期1年。D组分需要避光保存。





